吗啡伍用小剂量纳洛酮硬膜外对兔结肠Cajal间质细胞的影响
摘要：目的 研究Cajal间质细胞的形态学变化来探讨吗啡复合小剂量纳洛酮，经硬膜外给药对兔肠道运输功能的影响及可能机制。方法 新西兰兔45只随机分为3组，生理盐水对照组(NS组)、吗啡对照组(M组，硬膜外给予吗啡)和吗啡复合纳洛酮组(MN组，硬膜外给予吗啡及纳洛酮)，作硬膜外穿刺，分组给药一周后，剖腹取近端结肠组织，免疫组化标记结肠Cajal间质细胞，分析Cajal间质细胞的变化。结果 M组c-kit阳性细胞的表达数目及面积和NS组、MN组比较均明显减少，而NS组和MN组之间差异不明显。结论 硬膜外伍用小剂量纳洛酮能增强吗啡镇痛效能，减轻吗啡PCEA不良反应，促进术后胃肠动力恢复，与改变Cajal间质细胞的形态学表达有关。
关键词：吗啡；Cajal间质细胞；小剂量；纳洛酮；硬膜外；
近年来研究证明[1]，肠肌丛及环行肌黏膜下边缘的Cajal间质细胞(Interstitial cells of Cajal，ICCs)，是胃肠慢波活动的起搏器和传导者；它的分布和功能异常可能是肠道动力障碍性疾病的重要病因，与壁内神经及平滑肌细胞之间存在密切的信息传递[2]。吗啡是目前惟一长效、强效阿片类镇痛药物，既能选择性地阻滞脊髓传导疼痛的阿片受体，又能激活内源性镇痛系统；近年来有报道[3]小剂量纳洛酮(<1μg/kg)可减少吗啡的不良反应而不拮抗其镇痛效能。本研究比较硬膜外吗啡复合小剂量纳洛酮对兔肠道运输功能及结肠组织Cajal间质细胞密度变化影响，证实小剂量纳洛酮能增强吗啡的镇痛效能和减轻其不良反应。
1材料与方法1.1药物和仪器：盐酸吗啡注射液（沈阳第一制药），盐酸纳洛酮注射液（北京四环制药），SA1022-兔IgG(一抗为兔多克隆抗体)、5%BSA封闭液、生物素化山羊抗兔IgG(二抗)、SABC试剂盒（链酶亲和素-生物素-过氧化物酶复合物）、DAB显色试剂、粘片剂APES（均为武汉博士德公司）1.2动物分组：新西兰兔45只（南京青龙山动物场提供）；随机分为3组(n=15)。1.3兔硬膜外穿刺：以T1为标志，以L3～4间隙为中点，常规直入式穿刺，进针约2cm，置管深度1-2cm。1.4吗啡及纳洛酮给药剂量：每日吗啡给药量=（3.3×4mg／60）×体重／kg；每日纳洛酮给药量=（3.3×0.4mg／60）×体重／kg。
2结果 2.1免疫组化染色结果，比较结肠组织c-kit阳性细胞表达及面积。取兔近端结肠组织进行免疫组织化学染色，显色观察。细胞质染色呈棕色者判定为阳性细胞。每张切片选择5个高倍镜视野(×200)，计算c-kit阳性细胞面积。近端结肠组织M组c-kit阳性细胞较NS组明显减少，有显著差异；MN组较NS组无明显减少，统计学上无显著差异，见表一。2.2 硬膜外术后家兔结肠ICC数量的比较。在光镜下（20×20），随意选取肠肌间神经丛的5个神经节，分别统计每个神经节内ICC数量，然后求这5个神经节内ICC的均数，作为该家兔单个结肠神经节内ICC数目。家兔结肠ICC数量不同，M组结肠ICC数量明显少于NS组，差异有统计学意义（P<0.05）；MN组ICC数量与NS组比较无明显减少，差异无统计学意义（P>0.05）。见表二。
表1 三组家兔近端结肠c-kit阳性细胞面积比较（`x±s， *l04 um2)
项目 NS组 M组 MN组
近端结肠组织 3.75±2.59★ 1.95±1.60 3.72±1.83★
c-kit阳性细胞面积
与M组比较★P<0.05
表2 三组家兔结肠ICC数量（单位：个/神经节）
组 别 例 数 家兔结肠ICC数量
NS组 15 2.90±0.45★
M组 15 2.54±0.33
MN组 15 2.87±0.35★
与M组比较，★P<0.05
3讨论 目前对阿片类药物术后镇痛中加用小剂量纳洛酮的有效性说法不一，一些动物实验以及临床研究提示小剂量纳洛酮不拮抗甚至增强吗啡的镇痛效能，并减少其不良反应[4]，包括呼吸抑制、恶心、呕吐、瘙痒、成瘾、耐受等。金孝岠等[5]通过硬膜外纳洛酮混合吗啡用于切口痛家兔镇痛效应的实验发现，硬膜外小剂量纳洛酮混合吗啡可以产生良好的镇痛作用，并没有减弱吗啡的镇痛作用，同时能减轻胃肠运动抑制等不良反应。研究显示，纳洛酮明显减少吗啡引起的PONV作用，并促进病人胃肠动力恢复，纳洛酮作用于中枢阿片受体而保留吗啡的脊髓作用，可明显降低吗啡引起的不良反应且不影响吗啡的镇痛效应。利用c-kit免疫组织化学技术[6]，可以特异地观察ICC在肠道的分布及在病理状态下的异常分布。近年来肠道动力学异常与ICC的发病关系得到医学界的重视，并逐渐成为研究的热点。研究证实Cajal间质细胞在胃肠道电生理和动力发生以及动力障碍上具有重要作用。随着对ICC研究的深入，有可能为临床治疗硬膜外术后镇痛带来的胃肠功能障碍提供新思路。本研究是基于Cajal间质细胞数目的变化这个角度进行的动物实验，鉴于人和家兔之间存在明显的物种差异性，是否在人体实验时也有相似的结论尚需进一步研究证实。
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